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脂質體2000轉染DNA的操作過程
脂質體2000適用于把DNA轉染入懸浮或貼壁培養(yǎng)細胞中，是目前條件下zui方便的轉染方法之一。轉染率高，優(yōu)于磷酸鈣法，比它高5~100倍，能把DNA和RNA轉染到各種細胞。用脂質體2000進行轉染時，首先需優(yōu)化轉染條件，應找出該批LR對轉染某一特定細胞適合的用量、作用時間等，對每批LR都要做：先要固定一個DNA的量和DNA/LR混合物與細胞相互作用的時間，DNA可從1~5μg和孵育時間6小時開始，按這兩個參數(shù)繪出相應LR需用量的曲線，再選用LR和DNA兩者*的劑量，確定出轉染...
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2015-01-13
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HyClone胎牛血清培養(yǎng)平滑肌細胞的兩種方法
HyClone胎牛血清培養(yǎng)血管平滑肌細胞常用的方法有貼塊法(explant)和酶解離法(enzymedisperse)。下面一起來看下這兩種方法。1、貼塊法方法：動物經頸動脈放血后，在無菌操作下迅速取出胸腹主動脈段，置于含Hank's液的平皿中漂洗3次，將凝塊洗干凈后剝除外膜的纖維脂肪層，然后縱行切開血管，刮除內膜即內皮細胞迅速撕下中膜內、中層，切成約1mm寬的小條，浸泡在含血清的Hank's液中，并將撕下小組織塊種植于培養(yǎng)瓶壁。置于37℃恒溫箱，2h左右，取出培養(yǎng)瓶加入20...
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2015-01-06
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纖維素酶的性質及作用機理詳解
纖維素酶分子的大小因來源不同而不盡相同，三大類酶分子量一般在23Kda～146Kda之間。多數(shù)真菌和少數(shù)細菌的纖維素酶都受糖基化，糖基與蛋白之間以共價鍵結合，或呈可解離的絡合狀態(tài)。糖基化作用在一定程度上保護酶免受蛋白酶的水解，而纖維素酶正是由于糖基化，使其所含碳水化合物的比率在不同酶之間發(fā)生差異，導致酶的多形式和分子量的差別。通過比較分析，人們發(fā)現(xiàn)許多不同纖維素酶間表現(xiàn)出一定的同源性，且纖維素酶分子普遍具有類似的結構。由球狀的催化結構域(CD)、連接橋和纖維素結合結構域(CB...
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2014-12-20
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瓊脂糖凝膠電泳實驗之凝膠制作與點樣
一、瓊脂糖凝膠制作1、瓊脂糖凝膠濃度配制凝膠的濃度據(jù)實驗需要而變，一般在0．8％～2．0％之間，如果一次配制凝膠100ml，沒用完的凝膠可以再次融化，但隨著融化次數(shù)的增加，水分丟失也越多，凝膠濃度則會越來越高，導致實驗結果不穩(wěn)定，補水辦法：一是在容器上標記煮膠前的刻度，煮膠后補充相應的水分至原刻度；二是在煮膠前稱重，煮膠后補充水至原重量。粗略一點的方法是通過多次較恒定的煮膠條件得出一個經驗補水值。以保證凝膠濃度基本維持在原濃度。核酸染色劑溴化乙錠(ethidiumbromid...
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2014-12-10
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脂質體2000轉染細胞實驗材料及操作步驟
一、脂質體2000轉染細胞實驗材料：1、Vero細胞2、轉染級質粒3、DMEM細胞培養(yǎng)液：無血清DMEM、10%血清DMEM4、脂質體20005、6孔細胞培養(yǎng)板二、脂質體2000轉染細胞實驗操作步驟：（以6孔板為例予以說明）1、細胞鋪板：轉染前一天進行鋪板，第二天待細胞長成單層即可進行轉染。（Vero細胞按一傳三的比例進行傳代，一般10~12h即可。）2、溶液1：240ul無血清DMEM+10ullipofectamine2000perwell（總體積250ul）（溫育5mi...
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2014-12-05
13811479844
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